Journal 
가시귀진드기(Otobius megnini Duges)는 거미강 참진드기목 물렁진드기과에 속하는 종으로 다양한 포유동물에 기생하며, 드물게 사람에게 기생한 예가 있다(Diyes and Rajakaruna, 2016;Eads and Campos, 1984). 주된 숙주는 말이며, 감염 시 단순 귀의 염증 증상뿐만 아니라 근육 경련, 근긴장증, 산통 등 다양한 신경근육계 질환을 유발할 수 있는 것으로 보고되어 있다 (Aleman, 2011;Madigan et al., 1995;Miller, 2020). 또한 Babesia spp., Anaplasma spp., Coxiella burnetii 등 다양한 진드기 매개 질병의 매개체로의 가능성도 제기되고 있다(Diyes et al., 2018;Mahlobo-Shwabede et al., 2021).
O. megnini의 기원지는 북미 남서부이지만, 현재는 캐나다, 미국, 카리브해, 사하라 이남 아프리카, 남아시아 및 동아시아 일부 등 다양한 지역에 분포하는 것으로 보고되고 있다(Adams and Jenkins, 2020;Diyes and Rajakaruna, 2016;Keirans and Pound, 2003). 한국에서는 1989년 서울 경주마의 외이도에서 형태학적으로 확인된 이후(Kang et al., 1989) 추가 보고가 없었다.
그러나 2023년과 2024년에 본 연구를 통해 부산과 용인의 경주마에서 O. megnini가 재발견되었다. 이를 통해 국내에서 채집된 O. megnini 개체군의 유전적 특성과 진드기 매개 병원체 보유 여부를 조사함으로써 국내 말 개체군에서의 잠재적 위험성 평가에 활용될 수 있을 것이다.
Materials and Methods
시료 채집 및 형태 동정
한국 마사회의 국내 말에 대한 정기 검진 과정에서 신경 및 근육과 관련된 임상증상이 없는 정상 경주마의 외이도에서 독특한 진드기 개체가 발견되었다. 2023년에는 부산경마공원의 경주마 1두에서 17개체, 2024년에는 용인 승마장의 경주마 1두에서 30개체가 채집되었다. 채집된 47개체의 진드기는 70% 에탄올로 세척한 후 Yamaguti et al. (1971)의 분류 기준을 적용하여 실체현미경(Olympus SZ61, Olympus Corporation, Japan)으로 형태학적으로 동정하였다.
분자유전학적 동정
분자유전학적 동정을 위해 핵산은 Maxwell® RSC Viral Total Nucleic Acid Purification Kit (Promega, USA)를 사용해 제품의 지시사항에 따라 추출을 진행하였다. 추출된 핵산은 Folmer et al. (1994)과 Black 4th and Piesman (1994)의 방법에 따라 COX1 및 16S rRNA 두 유전자를 증폭하였다(Table 1). 증폭산물들은 마크로젠(대전, 한국)에서 염기서열을 분석하고, MEGA X (Kumar et al., 2018)를 사용하여 Tamura 3-parameter 모델과 Maximum-likelihood method로 계통분석을 실시하였다.
병원체 검사
채집된 O. megnini는 Anaplasma spp., Babesia spp., Borrelia spp., Coxiella burnetii, Ehrlichia spp., severe fever with thrombocytopenia syndrome virus를 포함한 총 6가지 진드기 매개 질병 검사를 하였다. C. burnetti는 Klee et al. (2006) 의 방법을 사용하여 검출하였으며, 그 외 5종 원인체는 상용화된 유전자진단키트(Koreagene, cat. CR307, CR3078)를 이용하였다.
Results
채집된 총 47개체의 진드기들 중, 17개체는 2023년 부산경마 공원의 경주마에서, 30개체는 2024년 용인 승마장의 경주마에서 채집되었다. 이들 중 8개체는 유충 단계로 인해 형태학적 동정이 불가능하였으나(Fig. 1 A, B), 나머지 39개체는 네 쌍의 다리를 가지고 있고 생식공이 보이지 않아 약충으로 분류되었다. 또한 등쪽에서 관찰 시 의두가 거의 보이지 않는 연진드기의 특징을 보였으며, 외피는 가죽 같은 질감을 띠고 짧은 가시가 다량 분포하였고, 순판은 존재하지 않았다(Fig. 1 C-F). 또한 충분히 흡혈한 개체에서는 몸의 중간 부위가 두드러지게 협착되어 전체적으로 바이올린과 유사한 형상을 보였다(Fig. 1 E, F). 이러한 형태적 특징을 종합하여 본 개체들을 O. megnini로 최종 동정하였다.
형태학적으로 동정이 불가능한 개체 8마리뿐만 아니라 형태 학적으로 O. megnini로 확인된 39개체도 동정결과를 재확인하기 위해 COX1과 16S rRNA 유전자 분석을 수행하였다. 그 결과 국내에서 얻은 개체들의 COX1(658 bp)과 16S rRNA (421 bp) 서열들은 각각 모두 동일하였으며, COX1의 경우 GenBank 에 등록된 O. megnini의 해외 COX1 서열들과(KJ133592, MG582606, NC023370, KC769589, ON800862, PV034293- PV034296, MK541811) 99.5-100%, 16S rRNA의 경우 해외의 서열들과(PV034715-PV034717, PP835224, ON800862, ON- 500638, NC023370, MK951983, KJ133592, KC769589, EF- 120989, L34325) 99.8-100%의 높은 상동성을 보였다. Maximum- likelihood 방법을 통한 계통분석에서 국내 O. megnini 서열은 남아프리카공화국, 마다가스카르, 미국, 멕시코, 이란, 레소토, 중국, 터키, 아르헨티나 등의 국가에서 보고된 서열들과 동일한 클러스터에 속하였다(Fig. 2). 분석이 완료된 47개의 O. megnini의 COX1과 16S rRNA 염기서열들은 GenBank에 등록하였다(COX1: OR342626–OR342634, OR342636–OR342639, PP145085–PP145088, PV107181–PV107210 / 16S rRNA: OR342667–OR342683, PV112039–PV112068).
진드기 매개 병원체 검출을 위한 검사 결과, 모든 시료에서 Coxiella burnetii, Babesia spp., Anaplasma spp., Ehrlichia spp., Borrelia spp., 그리고 SFTSV는 검출되지 않았다.
Discussion
O. megnini는 1883년 북미에서 최초 보고가 된 이후 전세계 적으로 발견보고가 있으며, 이는 O. megnini 는 유충과 약충 단계에서 숙주의 외이도에 부착하며, 약충 단계는 최대 200일까지 지속될 수 있어 숙주와 함께 장거리 이동이 가능한 특성과 관련이 있다(Diyes and Rajakaruna, 2016;Keirans and Pound, 2003). 한국의 경우, 1989년 최초 보고된 이후 아시아지역에는 채집보고가 없었으나, 2014년 스리랑카에서의 발견 보고와, 2022년 중국에서 보고된 유전자 서열이 보고되었다(Diyes et al., 2014). 본 연구에서 국내 처음으로 분석된 국내 O. megnini 의 유전적 특징은 전세계적으로 보고된 O. megnini 와 높은 유전적 상동성을 가지며 동일 집단에 속하였다. 재확인된 O. megnini는 1989년 국내에서 최초 보고된 이후 소규모 개체군이 유지되다가 감시 공백으로 인해 최근에 다시 발견되었을 가능성과 수입마 및 야생조류와 같은 숙주를 통해 국내로 재유입되었 을 가능성을 추측해 볼 수 있다(Hosseini et al., 2018;Hasle, 2013;Karakuş et al., 2022;Kim et al.,2017). 그러나, 국내 사육마 및 철새에서 진드기 분포조사에 관한 연구가 드물고, O. megnini 채집된 말에 대한 이력 정보가 부족하여 수입시기나 국가들을 파악할 수가 없어 O. megnini 유입에 관한 결론을 내리기는 어렵다.
진드기 매개 병원체 검출 결과는 채집된 모든 개체에서 음성이었으나 해외 연구에서는 O. megnini가 Babesia spp., Anaplasma spp., Coxiella burnetii 등을 병원체를 매개한다는 보고가 있다 (Diyes et al., 2018;Mahlobo-Shwabede et al., 2021) 말에서는 O. megnini의 감염은 근육 경련, 근긴장증, 산통 등 신경근육계 질환과 연관된다는 보고가 있어 국내 사육말에 대하여 정기적인 감시 및 국내 유입 방지를 위하여 수입마 검역 과정 중 유입방지를 위한 지속적인 감시가 필요할 것이다(Aleman, 2011;Madigan et al., 1995;Miller, 2020).
KSAE
